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项目介绍

细胞增殖及毒性检测是生物相容性测试的一种，检测药物或者新型材料在生物环境中的毒性情况，即通过检测材料或者药物对细胞的增殖或者生长的影响，来评价药物或材料的毒性或者活性，主要用于药物活性筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、抗肿瘤药效测定等；常用MTT法或者CCK-8法检测。

操作流程：

（1）收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度3x10⁴~5x10⁴个/mL；

（2）96孔加入细胞悬液，100ul/孔，边缘用pbs填充，5%CO₂、37℃孵育；

（3）培养24h后给药，设置3~6个复孔，5%CO₂、37℃孵育；

（4）孵育适当时间后，弃旧液，用无血清培养基与CCK8按照10:1稀释200ul/孔/无血清培养基与MTT按照9:1稀释，200ul/孔，继续培养至所需时间点；

（5）CCK8: 时间到后，酶标仪450nm/处测量各孔的吸光值。

客户提供：

（1）足量样品、样品信息（如细胞类型、分子量、溶解性、稳定性、保存条件等）；
（2）相关实验设计内容（如样品作用时间、浓度等、细胞株等）。

样品要求

1.待测样品（浓度用户指定）、实验方案、相关细胞、试剂盒及生物耗材等，平台可有偿提供。

项目案列

常见问题

MTT法检测细胞活性原理

在活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能将外源性MTT还原为不溶于水的蓝紫色甲臢化合物，用二甲基亚砜（DMSO）将其溶解成溶液，用酶标仪测定其浓度（OD490或者570)，从而定量测定细胞的存活比例，细胞增殖越多越快，对应的吸光度越高；细胞毒性越大，对应的吸光度越低。

CCK8法检测细胞活性原理

CCK-8细胞活性检测试剂中含有WST-8 —— 一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以为线粒体内的脱氢酶验明正身。在脱氢酶作用下，WST-8被还原生成橙黄色的甲瓒产物，用酶联免疫检测仪在OD 450nm波长处测定其光吸收值。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

相较于MTT法，CCK8试剂盒的优点有哪些？

1.使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；

2.CCK-8法能快速检测；

3.CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；

4.CCK-8法的重复性优于MTT 法；

5. CCK8适用于贴壁细胞和悬浮细胞；如样品容易沉淀或残留且易溶于DMSO，建议选用CCK8法检测。

学术文章

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