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等温量热滴定仪（ITC）

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项目介绍

可检测任意两种分子间的相互作用，它可以简单地通过测量两个溶液相互作用时吸收或放出的热量来提供分子相互作用的重要信息，如结合常数、结合位点数、自由能、焓和熵。

分子间相互作用过程中价键的形成和破坏需要释放或者吸收能量，绝大部分化学和生化过程也都伴随着热量的吸收和释放，微量热检测的是最基本、最普遍的物理量-热量变化。仪器灵敏度的提高让检测mcal或者ncal水平的热量成为可能，样品的用量也随着仪器设计的进步而减少到可以接受的程度，ITC 仪能实现微量研究。被分析的样品始终处于天然的溶液状态和构象，无需修饰。测试过程非光学检测，样品颜色、内在荧光、透明度对实验没有影响。热量测定可以在广泛的溶液环境和温度条件下进行，所以 ITC 仪能对广泛的样品进行测试分析。技术特点：分子量范围广、溶液中检测、无需标记、广泛适用性。

样品要求

核酸-小分子、生物分子-细胞相互作用、酶促反应动力学等，可以检测任意两种小分子之间的结合力。

要求检测样品的纯度高，抑制剂等溶剂需提供分子量。样品浓度越高越好，确保缓冲液、pH、DMSO匹配。

最少样品量：蛋白2mg，小分子10mM/500ul，蛋白多肽需低温寄送。

项目案列

点阵图

热量图

常见问题

KD，C-value与反应物浓度的选择

KD=弱结合，需要更高的配体浓度来饱和结合位点。低KD=强结合，只要较低的配体浓度就能饱和结合位点。因此，KD对选择合适的反应物浓度至关重要。

如果不清楚KD，可按经验浓度范围进行准备，样品池一般为10uM~10mM，滴定针比样品池浓度一般高10-20倍，建议初始尝试200uM滴20uM

反应物浓度=C-value*KD*N，C-value值一般在10-100之间实验结果最好。C-value太低，点阵图曲线很难达到饱和。C-value太高，点阵图曲线爆炸式地达到饱和。

为什么ITC要求上下样品间的缓冲液必须匹配呢？

轻微稀释放热会对结果产生影响。因此，必须使用一致的缓冲液，或者设置对照实验来消除背景稀释放热对结果的影响。

滴定间隔时间不足会导致什么样的结果呢？

基线不稳能反应哪些问题？

1.低基线

原因：（1）样本池填充不够；（2）弄脏的测量池会使上样效果不佳；（3）测量池里有气泡

2. 陡峭尖

原因：（1）测量池里有气泡；（2）基线尖刺因注射而成卷积状

3.向上步进式基线

原因：（1）测量池弄脏了；（2）样本池填充不够

4.向下步进式基线

原因：（1）测量池里有气泡；（2）基线尖刺因注射而成卷积状

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