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    解读文献里的那些图——流式细胞术
    来源: 时间:2025-01-14 09:28:36 浏览:2099次

    解读文献里的那些图——流式细胞术

     

    流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是一种高度灵敏的分析技术,它利用激光照射单个细胞或微粒,通过检测散射光和荧光信号来分析细胞的物理和化学特性;这项技术在生物学、医学研究和临床诊断中扮演着核心角色。

    一、基本原理

    流式细胞术的核心在于将细胞悬液通过一个非常细小的喷嘴,形成单细胞流,这些细胞逐一通过激光束。细胞与激光相互作用产生两种散射光信号和多个荧光信号:

    前向散射光(FSC):反映细胞的大小,因为大细胞会散射更多的光到前方。

    侧向散射光(SSC):体现细胞的内部结构复杂度,如细胞内颗粒的多少和密度。

    荧光信号:当细胞表面或内部的特定分子被荧光标记的抗体结合后,被激发的荧光素发出特定波长的光,用于定量分析特定蛋白质或核酸的存在和表达水平。

    二、图像类型与解读

    1. 直方图

    单参数直方图:展示单一参数(如FSCSSC)的分布情况。横坐标表示该参数的强度,纵坐标表示具有该强度的细胞数量。例如,通过FSC直方图可以区分大小不同的细胞群体。

    2. 散点图

    双参数散点图:同时展示两个参数(通常是FSCSSC,或两个荧光信号)的分布,每个点代表一个细胞,点的密集程度表示该区域细胞数量。通过设置“门”(Gating),可以选取特定的细胞群体进行分析,比如区分淋巴细胞和粒细胞。

    3. 等高线图与等密度图

    这些图型进一步可视化了散点图中的数据密度,颜色或灰度的变化表示细胞密度的增加,有助于识别不同细胞群的重叠区域,尤其是在多参数分析中。

    三、应用实例

    免疫表型分析:通过标记特定的细胞表面抗原,如CD4+ T细胞,流式细胞术可以精确计数并分析这些细胞的比例。

    细胞周期分析:使用DNA染料(如PI)标记细胞,通过FSC和荧光信号分析,可以区分G1SG2/M期的细胞,评估细胞增殖状态。

    凋亡检测:利用标记活细胞和凋亡细胞的荧光探针,可以区分正常细胞、早期凋亡细胞和晚期凋亡/坏死细胞。

    四、数据分析与解释

    门的设定:在分析过程中,研究者会根据直方图或散点图设定门,以圈定感兴趣的细胞群体,这一步骤对于准确识别和量化特定细胞至关重要。

    多参数分析:现代流式细胞仪能够同时分析多个荧光通道,提供细胞的多维度信息,这对于复杂细胞群体的解析尤为重要。

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    12条评论
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    全部 3小时前 四川
    文字是人类用符号记录表达信息以传之久远的方式和工具。现代文字大多是记录语言的工具。人类往往先有口头的语言后产生书面文字,很多小语种,有语言但没有文字。文字的不同体现了国家和民族的书面表达的方式和思维不同。文字使人类进入有历史记录的文明社会。
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