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石蜡切片技术里常用的染色法——HE染色

来源：时间：2024-11-07 10:14:41 浏览：643次

石蜡切片技术里常用的染色法——HE染色

石蜡切片技术是一种广泛应用于病理学、生物学等领域的制片技术，通过对生物组织进行固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、贴片、烤片等一系列处理，制备出可供显微镜观察的薄切片；在石蜡切片的观察中，染色是至关重要的一步，它可以使组织结构更加清晰，便于研究人员进行观察和分析；HE染色，即苏木精-伊红染色，是石蜡切片技术中最常用的染色方法之一。

一、原理

HE染色利用苏木精（Hematoxylin）和伊红（Eosin）两种染料的亲和力不同，对细胞的不同成分进行着色；苏木精是一种碱性染料，能够与细胞核中的酸性物质（如核酸）结合，使细胞核呈蓝色或紫色；伊红是一种酸性染料，能够与细胞质中的碱性物质（如蛋白质）结合，使细胞质呈红色或粉红色。

二、步骤

1.脱蜡：将石蜡切片放入二甲苯中，去除切片上的石蜡，使其透明。

2.梯度酒精脱水：将脱蜡后的切片依次放入高浓度到低浓度的酒精中，以去除二甲苯，使切片适应水环境。

3.水洗：用蒸馏水清洗切片，去除残留的酒精。

4.苏木精染色：将切片放入苏木精染液中，通常在室温下染色5-10分钟。

5.水洗：用蒸馏水清洗切片，去除多余的苏木精染液。

6.分化：将切片放入1%的盐酸酒精中分化，直至细胞核颜色清晰，背景几乎无色。

7.水洗：再次用蒸馏水清洗切片，停止分化。

8.返蓝：将切片放入弱碱性溶液中（如碳酸锂溶液），使细胞核颜色更加鲜艳。

9.伊红染色：将切片放入伊红染液中，通常染色1-3分钟。

10.水洗：用蒸馏水清洗切片，去除多余的伊红染液。

11.梯度酒精脱水：将切片依次放入低浓度到高浓度的酒精中，去除水分。

12.透明：将脱水后的切片放入二甲苯中，使其透明。

13.封片：用中性树胶或加拿大树胶封片，覆盖玻片。

三、注意事项

1.染液浓度和染色时间：染液浓度和染色时间需要根据组织类型和切片厚度进行调整，以达到最佳染色效果。

2.分化时间：分化时间不宜过长，以免过度分化导致细胞核颜色过淡或消失。

3.返蓝时间：返蓝时间不宜过长，以免细胞质着色受到影响。

4.切片脱水：在梯度酒精脱水过程中，应确保切片完全脱水，以免影响透明和封片。

5.封片：封片时，应避免气泡的产生，确保切片与盖玻片之间无空气。

四、应用

HE染色因其简单、快速、结果可靠等特点，被广泛应用于病理学诊断、生物学研究等领域；通过HE染色，可以清晰地观察到细胞核和细胞质的形态结构，对于判断组织的正常与否、病变性质和程度具有重要意义。

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