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    生物样本透射电镜测试的各类样品制备方法
    来源： 时间：2024-11-05 10:52:15 浏览：697次

    生物样本透射电镜测试的各类样品制备方法

     

    生物样本透射电镜（Transmission Electron Microscopy，简称TEM）是一种利用电子束穿透样品进行成像和分析的显微技术，具有极高的分辨率，能够观察到细胞结构、病毒、蛋白质等生物样品的纳米级细节；为了获得高质量的TEM图像，样品的制备至关重要。

    一、概述

    透射电镜样品制备的基本目标是保持生物样品的自然状态，同时提高样品的电子透明度，以便电子束能够穿透并产生清晰的图像；制备过程通常包括固定、脱水、渗透、包埋、切片、染色和安装等步骤。

    二、样品制备方法

    （一）固定

    固定是样品制备的第一步，目的是迅速杀死细胞，并尽可能保持其生前状态；常用的固定剂有戊二醛和锇酸，戊二醛能快速穿透细胞，固定细胞质和细胞膜，而锇酸则固定细胞核和细胞器。

    1. 戊二醛固定：将样品置于2.5%的戊二醛溶液中，4℃下固定数小时至过夜。

    2. 锇酸固定：戊二醛固定后，用锇酸进行后固定，通常在4℃下进行1-2小时。

    （二）脱水

    脱水是为了去除细胞中的水分，以便后续的渗透和包埋。常用的脱水剂有乙醇和丙酮，浓度从30%逐渐增加到100%。

    （三）渗透

    渗透是将脱水剂替换为能与包埋剂相容的溶剂，如环氧树脂，使包埋剂能够渗透到细胞内部。

    （四）包埋

    包埋是将样品嵌入到固体介质中，以便进行切片。常用的包埋剂有环氧树脂、聚酯树脂等。

    （五）切片

    切片是将包埋好的样品切割成超薄（通常50-100纳米）的切片，以供TEM观察。切片方法有超薄切片和冷冻切片等。

    1. 超薄切片：使用超薄切片机，如莱卡UC6或钻石刀，获得超薄切片。

    2. 冷冻切片：在冷冻状态下，使用冷冻切片机切割样品。

    （六）染色

    染色是为了增强样品的对比度，使其在TEM下更容易观察。常用的染色剂有醋酸铀、柠檬酸铅等。

    （七）安装

    将染色后的切片安装在TEM专用的铜网或微栅上，准备进行TEM观察。

    三、特殊样品制备方法

    1. 细胞内特定结构的标记：对于需要观察细胞内特定结构的情况，可以使用免疫金标记、免疫电子显微镜技术等对目标结构进行标记。

    2. 原位杂交：原位杂交技术可用于检测细胞内特定的RNA或DNA序列，结合TEM技术，可以观察到特定序列在细胞内的分布。

    3. 冷冻断裂技术：冷冻断裂技术适用于研究细胞膜的内部结构。样品在冷冻状态下断裂，暴露出细胞膜的内部结构，然后进行TEM观察。

    四、注意事项

    1. 在整个制备过程中，要尽量减少对样品的损伤，保持其原始结构。

    2. 确保固定、脱水、渗透、包埋等步骤的试剂和设备清洁，避免污染。

    3. 切片时要保证切片的厚度均匀，以便获得高质量的TEM图像。

    4. 染色过程中要控制染色时间，避免过度染色。

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    全部 3小时前 四川
    文字是人类用符号记录表达信息以传之久远的方式和工具。现代文字大多是记录语言的工具。人类往往先有口头的语言后产生书面文字，很多小语种，有语言但没有文字。文字的不同体现了国家和民族的书面表达的方式和思维不同。文字使人类进入有历史记录的文明社会。
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