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细胞增殖及毒性检测的常见实验方法

来源：时间：2024-09-30 10:05:50 浏览：474次

细胞增殖及毒性检测的常见实验方法

细胞增殖及毒性检测是生物医学研究中的重要内容，对于药物筛选、毒理学研究等领域具有重要意义。

以下介绍几种常见的细胞增殖及毒性检测实验方法：

一、MTT实验（噻唑蓝比色法）

1. 原理：MTT实验是一种检测细胞增殖的方法；MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐）可被活细胞内的线粒体酶还原成紫色结晶物甲簪，而死细胞无此功能；通过溶解结晶物，可测定吸光度，从而反映细胞增殖情况。

2. 方法：（1）将细胞接种于96孔板，加入不同浓度的待测物质；（2）培养一定时间后，加入MTT溶液；（3）继续培养4-6小时，弃去上清，加入DMSO溶解结晶；（4）酶标仪测定570nm处的吸光度值。

二、CCK-8实验（细胞计数试剂盒-8）

1. 原理：CCK-8实验与MTT实验类似，但其使用的试剂为WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯偶氮)-5-(2,4-二硫唑基)）盐；WST-8在细胞内的脱氢酶作用下产生黄色的甲簪，吸光度值与活细胞数量成正比。

2. 方法：（1）将细胞接种于96孔板，加入不同浓度的待测物质；（2）培养一定时间后，加入CCK-8溶液；（3）继续培养1-4小时，酶标仪测定450nm处的吸光度值。

三、Brdu实验（5-溴脱氧尿嘧啶核苷酸实验）

1. 原理：Brdu是一种类似胸腺嘧啶的核苷酸，可掺入DNA合成过程中；通过检测Brdu的掺入量，可以反映细胞增殖情况。

2. 方法：（1）将细胞接种于96孔板，加入不同浓度的待测物质；（2）培养一定时间后，加入Brdu溶液；（3）继续培养一定时间，固定细胞，加入抗Brdu抗体；（4）酶标仪测定450nm处的吸光度值。

四、克隆形成实验

1. 原理：克隆形成实验是通过统计克隆形成率来评价细胞增殖能力；克隆形成率越高，细胞增殖能力越强。

2. 方法：（1）将细胞接种于培养皿，加入不同浓度的待测物质；（2）培养一定时间后，弃去上清，固定细胞，染色；（3）显微镜下计数克隆数，计算克隆形成率。

五、EdU实验（5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷酸实验）

1. 原理：EdU是一种新型的DNA标记物，可替代Brdu进行细胞增殖检测；EdU与DNA的亲和力更高，检测信号更稳定。

2. 方法：（1）将细胞接种于96孔板，加入不同浓度的待测物质；（2）培养一定时间后，加入EdU溶液；（3）继续培养一定时间，固定细胞，加入荧光标记的抗EdU抗体；（4）荧光显微镜下观察细胞荧光强度。

六、LDH实验（乳酸脱氢酶释放实验）

1. 原理：LDH是一种胞内酶，当细胞膜受损时，LDH会释放到细胞外；通过检测培养上清中的LDH活性，可以评估细胞毒性。

2. 方法：（1）将细胞接种于96孔板，加入不同浓度的待测物质；（2）培养一定时间后，收集上清；（3）加入LDH底物，酶标仪测定490nm处的吸光度值。

七、中性红摄取实验

1. 原理：中性红是一种细胞活性染料，活细胞可将其摄入细胞内；通过测定细胞内中性红的含量，可以评估细胞毒性。

2. 方法：（1）将细胞接种于96孔板，加入不同浓度的待测物质；（2）培养一定时间后，加入中性红溶液；（3）继续培养一定时间，弃去上清，溶解细胞内的中性红；（4）酶标仪测定540nm处的吸光度值。

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