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HE染色提高染色效果的技巧分享

来源：时间：2024-09-10 11:12:45 浏览：488次

HE染色提高染色效果的技巧分享

HE染色（苏木精-伊红染色）是一种常用的组织学染色方法，广泛应用于病理学、生物学等领域。提高HE染色效果，对于病理诊断和科学研究具有重要意义。

一、准备工作

1. 组织固定：固定是染色成功的关键。使用10%中性甲醛溶液固定组织，固定时间一般为24小时。固定时间不宜过长或过短，以确保组织结构完整。

2. 脱水：脱水过程要彻底，避免组织内残留水分影响染色效果；建议使用梯度酒精（70%、80%、90%、95%、100%）进行脱水。

3. 透明：使用二甲苯进行透明处理，透明时间不宜过长，以免组织过于脆弱。

4. 浸蜡：选用熔点适宜的石蜡进行浸蜡，保证组织完全浸蜡。

二、切片制作

1. 切片厚度：切片厚度以4-6μm为宜，过厚或过薄都会影响染色效果。

2. 切片展平：切片在水中展平，避免皱褶和折叠。

3. 切片粘贴：使用粘附性较好的载玻片，确保切片牢固粘贴。

三、染色技巧

1. 苏木精染色：

（1）充分氧化：苏木精染液在使用前需充分氧化，使染液呈紫红色。

（2）控制染色时间：染色时间根据组织类型和细胞成分进行调整。一般染色时间为5-10分钟，时间过长会导致细胞核过度染色，时间过短则染色不充分。

（3）分化：使用1%盐酸酒精进行分化，分化时间不宜过长，以免细胞核褪色。

2. 伊红染色：

（1）选用合适浓度的伊红染液：一般使用1%的伊红染液，浓度过高会导致细胞质染色过深，过低则染色不充分。

（2）控制染色时间：伊红染色时间一般为1-3分钟，根据实际情况调整。

四、脱水、透明、封片

1. 脱水：使用梯度酒精（95%、100%）进行脱水，每个梯度酒精浸泡2-3次，每次1-2分钟。

2. 透明：使用二甲苯进行透明处理，透明时间不宜过长，以免组织过于脆弱。

3. 封片：选用中性树胶或加拿大树脂进行封片，封片时避免气泡产生。

五、注意事项

1. 染液配制：严格按照配方配制染液，确保染液质量。

2. 染液更新：定期更换染液，避免染液老化影响染色效果。

3. 室温控制：染色过程中，保持室温在18-25℃，避免温度波动影响染色效果。

4. 避光操作：在染色过程中，尽量避免强光照射，以免染料分解。

5. 清洁仪器：确保染色缸、载玻片等仪器清洁，避免杂质影响染色效果。

六、常见问题及解决方法

1. 细胞核染色过深：适当缩短苏木精染色时间，加强分化。

2. 细胞质染色过深：适当缩短伊红染色时间，降低伊红染液浓度。

3. 染色不均匀：检查切片展平情况，确保切片均匀接触染液。

4. 组织脱落：检查切片粘贴情况，确保切片牢固粘贴。

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