快捷下单入口 关于 合作 招聘 新人手册 会员中心

    热线:400-152-6858

    测试狗科研服务

    预存 免费试测 登录
    Document
    当前位置:文库百科文章详情
    蛋白质免疫印迹实验WB的关键步骤精讲与演示
    来源: 时间:2024-08-14 10:16:25 浏览:469次

    蛋白质免疫印迹实验WB的关键步骤精讲与演示

     

    蛋白质免疫印迹实验(Western Blotting, WB)是一种用于检测特定蛋白质在样品中的表达情况的技术;它结合了电泳、蛋白质转移、抗原抗体反应和显色反应等多个步骤,具有高度的灵敏性和特异性。

    一、概述

    蛋白质免疫印迹实验的基本原理是将蛋白质通过电泳分离后,转移至固相载体上,然后利用特异性抗体与目标蛋白质结合,并通过显色反应或其他检测手段揭示目标蛋白质的存在和相对含量。

    二、关键步骤

    1. 样品准备:蛋白质提取:从细胞或组织中提取蛋白质,通常使用含有去污剂和蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液。蛋白质定量:使用Bradford法、BCA法或Lowry法等对提取的蛋白质进行定量。

    2. 蛋白质电泳制备SDS-PAGE凝胶:根据蛋白质的分子量选择合适的凝胶浓度。加样:将蛋白质样品与上样缓冲液混合后,上样至凝胶中。电泳:在电泳仪中进行电泳,蛋白质根据分子量大小在凝胶中分离。

    3. 蛋白质转移准备转移膜:通常使用PVDF膜或硝酸纤维素膜。转移装置:将凝胶、转移膜和滤纸组装在转移装置中。电转移:在转移缓冲液中,通过电场作用将蛋白质从凝胶转移至膜上。

    4. 封闭使用含牛血清白蛋白(BSA)或脱脂奶粉的封闭液封闭膜上的非特异性结合位点,减少背景信号。

    5. 抗体孵育一抗孵育:使用特异性一抗与目标蛋白质结合,通常在4°C过夜孵育。洗膜:使用TBSTPBS缓冲液洗去未结合的一抗。二抗孵育:加入带有酶标记的二抗,与一抗结合,室温孵育1-2小时。

    6. 显色反应使用化学发光底物或酶底物,通过显色反应产生信号,揭示目标蛋白质的位置和相对含量。使用X光胶片或CCD相机拍摄图像,进行定量分析。

    三、注意事项与技巧

    1. 确保样品、抗体和试剂的质量,避免交叉污染。

    2. 控制电泳和转移条件,确保蛋白质分离和转移的效果。

    3. 优化抗体孵育条件,包括抗体浓度和孵育时间。

    4. 显色反应时,注意底物的浓度和反应时间,避免过度显色。

    四、应用

    蛋白质免疫印迹实验广泛应用于基础研究、临床诊断、药物开发等领域,用于检测蛋白质的表达、修饰、相互作用等。

     

    评论 / 文明上网理性发言
    12条评论
    全部评论 / 我的评论
    最热 /  最新
    全部 3小时前 四川
    文字是人类用符号记录表达信息以传之久远的方式和工具。现代文字大多是记录语言的工具。人类往往先有口头的语言后产生书面文字,很多小语种,有语言但没有文字。文字的不同体现了国家和民族的书面表达的方式和思维不同。文字使人类进入有历史记录的文明社会。
    点赞12
    回复
    全部
    查看更多评论
    相关文章

    TMA技术的基本概念、应用领域以及实际操作中的要点

    2023-12-06

    恒电流间歇滴定法GITT的基本原理以及测试教程

    2022-08-12

    一文详解扫描电子显微镜(SEM)的工作原理及应用技术

    2023-10-08

    接触角测试(CA)的原理、样品制备要求及实际应用

    2023-11-16

    详解XRD多晶与单晶材料的差异

    2023-12-21

    Plos One:水刊?神刊?很多人嘴上说不要,私下却偷偷投稿!

    2022-08-09

    项目推荐/Project
    蛋白质免疫印迹实验(WB)

    蛋白质免疫印迹实验(WB)

    热门文章/popular

    【科研干货】电化学表征:循环伏安法详解(上)

    晶体结构可视化软件 VESTA使用教程(下篇)

    手把手教你用ChemDraw 画化学结构式:基础篇

    电化学实验基础之电化学工作站篇 (二)三电极和两电极体系的搭建 和测试

    【科研干货】电化学表征:循环伏安法详解(下)

    基础理论丨一文了解XPS(概念、定性定量分析、分析方法、谱线结构)

    微信扫码分享文章

    意见反馈

    有奖举报

    商务合作

    ...

    更多

    公众号

    关注我们 了解更多

    小程序

    随时预约 掌握进度

    举报有奖

    TEL: 191-3608-6524

    如:在网络上恶意使用“测试狗”等相关关键词误导用户点击、恶意盗用测试狗商标、冒称官方工作人员等情形,请您向我们举报,经查实后,我们将给予您奖励。

    举报内容:

    200

    上传附件:
    文件格式不正确,请重新上传文件格式不正确,请重新上传文件格式不正确,请重新上传
    文件格式:jpg、jpeg、png、gif、tif、doc、docx、ppt、pptx、xls、xlsx、pdf、zip、rar
    联系方式
    姓名
    电话
    提交意见

    意见反馈

    Suggestions

    您可以在此留下您宝贵的意见,您的意见或问题反馈将会成为我们不断改进的动力。

    意见类型
    测试服务
    网站功能
    财务报账
    其他类型
    意见内容

    200

    联系方式
    姓名
    电话
    提交意见

    收起

    01

    专属信用额度,先测后付0元下单

    02

    下单享高额积分,万千好礼免费兑

    200
    200元无门槛优惠券
    立即激活 立即下单
    已使用
    已作废

    全流程在线可视化,便捷高效触手可及

    如下单过程中有任何疑问或需要帮助,请随时咨询专属顾问~
    9
    9折无门槛优惠券

    支付一笔订单后可领取

    立即领取 立即下单
    已使用
    已作废

    免费测+惊喜盲盒+高额福利,多重福利大放送

    新人免费测

    双双开盲盒(100%中奖)

    邀请人专享

    受邀人专享

    创建/加入团队,解锁定制化权益

    01

    1500元团队专属优惠券

    02

    万元大额信用额度,享先测后付

    03

    团队成员统一开票报销;

    04

    专业工程师课题专属服务

    领取成功,请下单
    请您支付一笔订单后才可以领取优惠券
    Document
    关于我们 新手帮助 测试干货 商务合作 基金查询 相关资质 模拟计算 现场测试 服务项目 科研绘图 同步辐射 电池行业

    联系方式/contact

    400-152-6858

    工作时间/work time

    09:00-18:00

    测试狗公众号

    关注我们 了解更多

    测试狗小程序

    随时预约 掌握进度

    蜀公网安备51010602000648号

    蜀ICP备17005822号-1

    成都世纪美扬科技有限公司

    Copyright@测试狗·科研服务