快捷下单入口 关于 合作 招聘 新人手册 会员中心

    热线:400-152-6858

    测试狗科研服务

    预存 免费试测 登录
    Document
    当前位置:文库百科文章详情
    深度解析:免疫印迹实验挑战传统蛋白质认知
    来源: 时间:2024-06-12 09:27:49 浏览:1482次

    深度解析:免疫印迹实验挑战传统蛋白质认知

     

    免疫印迹实验,又称为西方印迹实验(Western Blotting),是一种用于检测特定蛋白质存在与表达水平的技术该技术自20世纪70年代问世以来,已经在生物医学研究领域发挥了重要作用;免疫印迹实验不仅能够验证蛋白质的表达,还可以分析蛋白质的翻译后修饰、鉴定蛋白质的亚细胞定位以及监测蛋白质的动态变化。

    一、实验原理

    免疫印迹实验基于抗原-抗体反应的原理,结合凝胶电泳分离蛋白质和转移技术,将蛋白质从凝胶中转移到固相支持物(如硝酸纤维素膜)上;转移到膜上的蛋白质可以与特异性抗体结合,通过显色反应,从而实现对特定蛋白质的检测。

     

    二、实验步骤

    1. 蛋白质样品制备:首先,需要提取细胞或组织中的总蛋白质,并对其进行定量。

    2. 蛋白质分离:将制备好的蛋白质样品进行凝胶电泳分离常用的分离胶有SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)Criterion TM Pre-Cast Slab Gel

    3. 蛋白质转移:将分离后的蛋白质从凝胶转移到硝酸纤维素膜上;常用的转移方法有湿转和半干转。

    4.  blocking:将转移好的膜用5%的脱脂奶粉或BSA溶液进行 blocking,以减少非特异性背景。

    5. 免疫杂交:将膜与特异性一抗进行杂交,然后用辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记的二抗进行检测。

    6. 显色:使用化学发光剂或酶底物进行显色,观察特定蛋白质的表达。

     

    三、应用

    1. 发现新的蛋白质:免疫印迹实验可以帮助研究者发现新的蛋白质,尤其是那些在生物体中表达量较少的蛋白质;通过免疫印迹实验,研究者可以验证这些新发现的蛋白质是否在特定细胞类型或生理状态下表达,进而深入研究其功能和作用机制。

    2. 分析蛋白质的翻译后修饰:翻译后修饰是蛋白质功能调控的重要方式;免疫印迹实验可以分析蛋白质在不同翻译后修饰状态下的表达水平,从而揭示蛋白质功能的调控机制。

    3. 研究蛋白质的亚细胞定位:免疫印迹实验可以监测蛋白质在细胞不同部位的表达情况,有助于研究蛋白质的亚细胞定位及其在细胞内传递信息的作用。

    4. 监测蛋白质的动态变化:免疫印迹实验可以检测蛋白质在不同生理或病理状态下的表达水平变化,从而揭示蛋白质在生物体内的动态调控过程。

    5. 验证蛋白质相互作用:免疫印迹实验可以用于验证蛋白质之间的相互作用;通过免疫印迹实验,研究者可以检测相互作用蛋白质在细胞内的共表达情况,进而探讨它们在生物体中的功能关联。

    评论 / 文明上网理性发言
    12条评论
    全部评论 / 我的评论
    最热 /  最新
    全部 3小时前 四川
    文字是人类用符号记录表达信息以传之久远的方式和工具。现代文字大多是记录语言的工具。人类往往先有口头的语言后产生书面文字,很多小语种,有语言但没有文字。文字的不同体现了国家和民族的书面表达的方式和思维不同。文字使人类进入有历史记录的文明社会。
    点赞12
    回复
    全部
    查看更多评论
    相关文章

    一文详解扫描电子显微镜(SEM)的工作原理及应用技术

    2023-10-08

    接触角测试(CA)的原理、样品制备要求及实际应用

    2023-11-16

    恒电流间歇滴定法GITT的基本原理以及测试教程

    2022-08-12

    TMA技术的基本概念、应用领域以及实际操作中的要点

    2023-12-06

    热重分析(TG-DTG)曲线的几种解析方法

    2023-12-26

    详解XRD多晶与单晶材料的差异

    2023-12-21

    项目推荐/Project
    蛋白质免疫印迹实验(WB)

    蛋白质免疫印迹实验(WB)

    SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

    SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

    热门文章/popular

    【科研干货】电化学表征:循环伏安法详解(上)

    晶体结构可视化软件 VESTA使用教程(下篇)

    手把手教你用ChemDraw 画化学结构式:基础篇

    基础理论丨一文了解XPS(概念、定性定量分析、分析方法、谱线结构)

    电化学实验基础之电化学工作站篇 (二)三电极和两电极体系的搭建 和测试

    【科研干货】电化学表征:循环伏安法详解(下)

    微信扫码分享文章

    意见反馈

    有奖举报

    商务合作

    ...

    更多

    公众号

    关注我们 了解更多

    小程序

    随时预约 掌握进度

    举报有奖

    TEL: 191-3608-6524

    如:在网络上恶意使用“测试狗”等相关关键词误导用户点击、恶意盗用测试狗商标、冒称官方工作人员等情形,请您向我们举报,经查实后,我们将给予您奖励。

    举报内容:

    200

    上传附件:
    文件格式不正确,请重新上传文件格式不正确,请重新上传文件格式不正确,请重新上传
    文件格式:jpg、jpeg、png、gif、tif、doc、docx、ppt、pptx、xls、xlsx、pdf、zip、rar
    联系方式
    姓名
    电话
    提交意见

    意见反馈

    Suggestions

    您可以在此留下您宝贵的意见,您的意见或问题反馈将会成为我们不断改进的动力。

    意见类型
    测试服务
    网站功能
    财务报账
    其他类型
    意见内容

    200

    联系方式
    姓名
    电话
    提交意见

    收起

    01

    专属信用额度,先测后付0元下单

    02

    下单享高额积分,万千好礼免费兑

    200
    200元无门槛优惠券
    立即激活 立即下单
    已使用
    已作废

    全流程在线可视化,便捷高效触手可及

    如下单过程中有任何疑问或需要帮助,请随时咨询专属顾问~
    9
    9折无门槛优惠券

    支付一笔订单后可领取

    立即领取 立即下单
    已使用
    已作废

    免费测+惊喜盲盒+高额福利,多重福利大放送

    新人免费测

    双双开盲盒(100%中奖)

    邀请人专享

    受邀人专享

    创建/加入团队,解锁定制化权益

    01

    1500元团队专属优惠券

    02

    万元大额信用额度,享先测后付

    03

    团队成员统一开票报销;

    04

    专业工程师课题专属服务

    领取成功,请下单
    请您支付一笔订单后才可以领取优惠券
    Document
    关于我们 新手帮助 测试干货 商务合作 基金查询 相关资质 模拟计算 现场测试 服务项目 科研绘图 同步辐射 电池行业

    联系方式/contact

    400-152-6858

    工作时间/work time

    09:00-18:00

    测试狗公众号

    关注我们 了解更多

    测试狗小程序

    随时预约 掌握进度

    蜀公网安备51010602000648号

    蜀ICP备17005822号-1

    成都世纪美扬科技有限公司

    Copyright@测试狗·科研服务