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HE染色实验原理与步骤讲解

来源：时间：2022-12-30 09:32:04 浏览：10586次

一、原理

苏木精-伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining )，简称HE染色。HE染色是组织学、病理学教学与科研中最基础、使用最广泛的技术方法之一。

苏木精染液为碱性，可以将组织的嗜碱性结构（如核糖体、细胞核及细胞质中的核糖核酸等）染成蓝紫色；伊红为酸性染料，可以将组织的嗜酸性结构（如细胞内及细胞间的蛋白质，包括路易体、酒精小体以及细胞质的大部分）染成粉红色，使整个细胞组织的形态清晰可见。组织切片方法是教学、科研、病理检验工作中非常常用的一种试验方法，HE染色则是在制作切片的过程中最常用的染色方法。

二、实验标本

石蜡切片、冰冻切片

三、实验试剂材料

多聚甲醛、酒精、二甲苯、石蜡、苏木精水溶液、酒精伊红染色液、生理盐水、蒸馏水、PBS等实验必备溶剂

四、实验步骤

（1）样本组织固定与切片：首先将组织样本进行常规的石蜡包埋。在模具中加入液态石蜡，将待包埋的组织样本放入石蜡中，确保组织位置规整。补充少许液态的石蜡后，进行降温冷冻，使石蜡变为固态达到组织固定的效果，然后使用石蜡切片机进行切片，厚度在４-８um左右。将切完后的组织切片放入载玻片上使用40℃温水浸泡使组织充分伸展。

（2）组织样本脱蜡：将待测组织样本切片放于二甲苯中，充分浸泡10min，浸泡完后更换二甲苯继续浸泡10min，目的是使用二甲苯将切片中的石蜡溶解，这样可以在进行染液染色的时候，染液可以充分进入组织种，同时，二甲苯还可以起到透明的作用，使切片更容易观察。

（3）组织样本水化：将浸泡过二甲苯的待测组织样本先放入无水乙醇中浸泡5min，使脱蜡时用的二甲苯可以被洗脱出去，使水可以进入组织中；再依次置于95%、85%、70%乙醇中各浸泡５min以达到充分水化的效果。

（4）组织切片苏木素染色、分化与反蓝：将水化后的组织样本的切片使用PBS溶液浸泡清洗，每次浸泡５min，总共清洗３次。之后用移液枪吸取已经预先配制好的苏木素染色液，每个组织切片滴加100ul，充分染色10min。染色完毕后使用蒸馏水洗去多余的苏木素染色液。然后再使用1%的盐酸乙醇进行分化，使细胞核中结合过多的染液和细胞浆中的多余的染液被除去。分化完成后，再用双蒸水将组织切片冲洗干净。为了使苏木素染蓝色，使用弱碱性的促蓝液加入组织切片中，让细胞核染蓝色。反蓝结束后先用清水进行清洗，再用双蒸水将组织切片冲洗干净。

（5）组织切片伊红染色与脱水：向上一步驟的组织样本切片中加入伊红染液，并使组织可以充分染色3min，染色完毕后，再将组织切片进行梯度脱水，分别使用浓度为80%、95%以及无水乙醇进行操作。80%的乙醇脱水5s，95%乙醇脱水2min，无水乙醇脱水2min。

（6）组织样本切片风干封片：将脱水后的组织样本切片使用二甲苯浸泡２次，每次持续４min，然后将组织样本切片干，并使用中性树胶封片。

（7）最后在显微镜下观察并拍照

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