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氨基酸分析仪的介绍和基本原理、应用

来源：时间：2022-12-05 10:35:25 浏览：3252次

用来进行蛋白质、肽及其他药物制剂的氨基酸组成或含量的测定的仪器，称为氨基酸分析仪。必须先蛋白质及肽水解成单个氨基酸，然后再进行氨基酸分析。其是以阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定为基准的离子交换色谱仪。
和普通HPLC相比较，仪器有着相似的基本结构。然而针对氨基酸分析进行了如氮气保护、惰性管路、在线脱气、洗脱梯度及柱温梯度控制等细节优化。

简介

基本原理

氨基酸混合物在流动相（缓冲溶液）的推动下从装有阳离子交换树脂的色谱柱流经流经，各氨基酸与树脂中的交换基团交换离子。当洗脱时使用的pH缓冲溶液不同时，氨基酸混合物由于不同的交换能力而分离，分离出的单个氨基酸组分与茚三酮试剂发生反应，生成紫色化合物或黄色化合物，其在570nm、440rnn的吸光度用可见光检测器进行检测。这些有色产物对应的吸收强度与洗脱出来的各氨基酸浓度之间的关系和朗伯-比尔定律相符合。以此为依据可以定性、定量分析氨基酸各组分氨基酸分析仪也可利用阴离子交换分离后经积分脉冲安培法检测。此检测方法不需要柱前或柱后衍生待测氨基酸。

系统

一般细分为蛋白水解分析系统（钠盐系统）和游离氨基酸分析系统（锂盐系统）两种系统。梯度洗脱利用不同浓度和pH值的柠檬酸钠或柠檬酸锂来进行。在这当中，钠盐系统每次分析的氨基酸至多能够达到大约25种。有比较快的速度以及比较好的基线平直度；锂盐系统每次分析的氨基酸至多能够达到大约50种，然而和钠盐系统相比，速度比较慢，也没有较好的基线平直度。

效果

相比较于目前已知的氨基酸分析方法，和HPLC柱前衍生方法相比较，除了灵敏度（Zdi检测限）稍低以外，在如分离度、重现性、操作简便性、运行成本等其他方面，都比其他分析方法要好。

特点

1、高灵敏度:

按照蛋白水解液标准作为例子，能够检测到3pmoL。

2、快速、高分辨率:

水解氨基酸仅需半个小时的分析时间，生理体液仅需110分钟。

3.柱后衍生技术：

和氨基酸反应之前才混合两种反应液，使反应液的使用期限得到了有效的延长，并且不需要额外的制冷装置存放。

4、氨气排除系统:

除氨柱増加了，能够将氨在分析过程中对基线及峰形的干扰很好地进行排除。

应用