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文库百科TEM测试如何低速离心取材以及送样方法？
来源：测试GO 时间：2022-09-16 14:51:47 浏览：1647次
在我们进行TEM测试时，低速离心取材以及送样是实验的重要的一部分，下面教大家一个所有类型均适用的细胞样品操作方法：
1. 最好刮取细胞，收集在离心管中，1500 rpm离心5 ~ 10 min（初次离心参数可按自己的经验调整，目的是不损伤细胞结构的情况下去掉培养液成分）。
2. 弃上清，加入常温（平时固定液4℃保存，临用前拿出复温到室温或体温）的3%戊二醛固定液，重悬细胞。常温固定2 min。
3. 转移至1.5 ml尖底EP管，2000 rpm离心10 min。此步离心后，细胞应为约半颗绿豆大小。
4. 用吸管小心弃上清，加入室温的0.1M PB或等渗PBS，重悬细胞。再以1000 rpm离心5 ~10 min。
5. 以相同条件重复上述重悬、离心步骤，再次漂洗细胞（不要偷懒，要洗第二遍）。
6. 用吸管小心弃上清，加入预热到40℃的GT2(实验室提供的特殊固定液)专用溶液重悬细胞（轻轻摇匀或吹吸均可，不要有肉眼可见的大块）；立即以3000 rpm离心10 min。
7. 用吸管尽快小心弃上清；然后密闭管盖，转入4℃静置10 min（严禁结冰）。
8. 沿管壁缓慢加入固定液，不要冲击细胞团，静置30 min后可送样。
重点：
（1）固定和各项操作都是室温条件，GT2(实验室提供的特殊固定液)本身要预热到40℃，GT2凝结前没有需要预冷的步骤。
（2）取材完成后，在4℃保存，保存和运输期间严禁结冰（太靠近冰箱后壁或冰袋运输都可能使样品结冰。冬季宁可常温送样）。
（3）观察细胞连接的实验，严禁用消化的方法收集细胞。
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